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本制品是一种使用新型核酸纯化介质包被的磁珠，用于稳定、高效、便捷地从DNA琼脂糖凝胶中回收目的DNA的试剂盒。本试剂盒和传统的纯化方法相比，操作过程中不涉及酚/氯仿等有毒试剂。

本试剂盒的融胶液缓冲能力较强，经测试不会因融胶而出现体系pH变化幅度大而导致DNA与磁珠结合能力下降的情况，因此体系中无需添加甲酚红指示剂进行特定情况的纠正。

本试剂盒适合PCR产物、质粒DNA酶切出来的DNA片断、超螺旋质粒DNA单酶切后的线性化产物或DNA连接产物等在琼脂糖凝胶电泳后切胶产物的回收。纯化所得DNA可直接用于酶切、连接、转化细菌、测序、PCR、杂交等后续操作。

目前凝胶DNA回收的方法主要为柱回收法。该方法通常需要反复离心，或者需要特殊的抽滤装置，而且柱纯化过程中的纤维切割对大片段DNA回收不太有利。而磁珠法条件温和，整个操作步骤无需繁琐的反复离心或抽滤操作，而以简单的磁铁吸附所代替，因而确保了操作的快速和便捷。


本试剂盒的原理和主要操作过程如图1所示。琼脂糖凝胶在融胶液中迅速融解，DNA充分释放，再与磁珠特异性结合，在外界磁场(如磁分离架)的作用下，磁珠与相应溶液可以快速而高效地分离，经洗涤充分除杂质，最后用洗脱液将DNA从磁珠上洗脱下来，即可获得高纯度的目的DNA样品。

图1．BalbMag磁珠法DNA凝胶回收试剂盒回收原理示意图。


本试剂盒具有融胶速度快、操作灵活便捷、回收效率高、纯度好、可回收DNA片段大小范围广等优点。根据实际状况灵活调节磁珠用量，通常20分钟内即可完成目的DNA片段的回收。适用于100bp以上DNA片段的纯化，对达到10kb片段DNA的纯化也能保持较好的效果。通常回收率达到60～80%，对200bp以下小片段和10kb以上大片段的回收率有所下降。本试剂盒对不同产物及分子量DNA的凝胶回收效果见图2。

图2．BalbMag磁珠法DNA凝胶回收试剂盒的效果图。DNA Marker(货号：YT020)、5.6kb或2.8kb的单酶切的产物、1kb或190bp的PCR产物经本试剂盒凝胶回收前后的比较，实际回收效果会因实验条件、操作等而存在一定差异，本图仅供参考。
M：Marker；
B (Before)：凝胶回收前；
A (after)：凝胶回收后。

组分	50T	200T
BalbMag磁珠	1.5mL	6mL
溶液I(融胶液)	20mL	80mL
溶液II(洗涤液)	26mL	2×52mL
溶液III(洗脱液)	5mL	20mL

保存：室温，有效期一年。其中BalbMag磁珠长期不使用时，可置于4℃保存更长时间。

• 需自备无水乙醇和磁分离装置。
  
• 第一次使用前在每瓶溶液II (洗涤液)中加入指定量的无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。
  
  • 每瓶26mL溶液II第一次使用前加入39mL乙醇；
    
  • 每瓶52mL溶液II第一次使用前加入78mL乙醇。
• 磁珠悬液在静置后会发生沉降，使用前一定要涡旋震荡或颠倒数次至充分混匀后再使用。
  
• 磁分离前应适度震荡离心管使磁珠充分分散后再靠近磁场。如果出现磁珠挂壁现象，可以在磁珠聚集后晃动管内液体，使挂壁的磁珠流下。
  
• 本制品适用于手工抽提，也可用于工作站或核酸自动提取仪。
  
• 为提高回收效率，电泳时最好更换电泳液并适当降低电压以避免电泳过程中溶液发热，切胶时应尽量减少紫外照射时间以减少DNA损伤并尽可能割除不含DNA的凝胶部分。
  
• 可用去离子水代替洗脱液进行洗脱，但去离子水的pH不应低于6.5，如偏低可用低浓度NaOH溶液调节至7.5-8.5。
  
• 溶液I (融胶液)对人体有一定的刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。
  
• 本制品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药品。
  
• 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

• 切胶回收后，称重，将胶切碎或在离心管内用1mL枪头捣碎。
  
• 加入等体积的溶液I (融胶液)，如胶为100mg，则加100μL溶液I (融胶液)，vortex或颠倒混匀。
  注意：通常一次不超过800mg，如样品量大于800mg，则应先取部分与磁珠进行结合，磁分离弃上清后加入剩余样品继续与磁珠结合。
  
• 50～60℃水浴加热约10分钟至胶全融，期间需轻微vortex或颠倒混匀3～4次，以加速凝胶融解。
  注意：如果胶碎片较小，3～5分钟即可全融，凝胶碎片较大则需较长时间，胶全融后至少再加热2分钟。50～60℃间任一温度都适合于本试剂盒。如果DNA片断大于5kb，宜颠倒混匀，vortex容易导致大片断DNA断裂。
  
• 参照下表用量加入BalbMag磁珠悬液(使用前务必混匀)，vortex或颠倒混匀后，室温放置3～5分钟。将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
  注意：磁珠在使用前一定要涡旋或震荡混匀。如有必要，可适当增加磁珠用量，延长结合时间以提高得率。
  

  胶块重量(mg)	磁珠用量(μl)	第一次洗涤液用量(μl)	第二次洗涤液用量(μl)	洗脱液用量(μl)
  10-100	10	250	500	20-30
  100-250	20	500	500	40-50
  250-500	30	750	500	60-80
  500-800	40	1000	500	80-100

• 参照上表，通常加入250～750μL溶液II (洗涤液)，点震涡旋或轻柔震荡使磁珠分散开，颠倒2次后将离心管置于磁力架的磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸除残液。
  注意：如果离心管内盖有磁珠，可按住离心管整体上下颠倒两次，使磁珠被完全吸附，然后弃去上清。洗涤液用量可随磁珠的用量适当增减。通常洗涤液用量为磁珠用量的25倍左右，即20μL磁珠加入500μL洗涤液，30μL磁珠加入750μL洗涤液。
  
• 加入500μL溶液II (洗涤液)，重复5的操作，最终尽量吸净残液。
  
• 将离心管置于37℃鼓风烘箱5分钟，或室温放置5～10分钟，确保残留的乙醇等微量液体完全挥发。
  
• 参照上表，加入20～100μL溶液III (洗脱液)，点震涡旋或轻柔震荡使磁珠悬于溶液中，室温孵育3～5分钟，其间甩动离心管2～3次。将离心管置于磁场中，待磁珠完全聚集后，小心吸取溶液至新离心管中，置于-20℃保存，所得溶液即为回收的DNA样品。
  注意：洗脱液的用量可参考步骤4后表格，其用量一般随磁珠用量增加而相应增加，为提高洗脱效率，通常不少于磁珠用量的2倍，为提高样品浓度，也可适当减少洗脱液用量。约50～55℃洗脱比室温洗脱效率略高。

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